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落叶松尺蛾核型多角体病毒形态特征及分子检测技术建立

王少博 谢丹洁 张泽辉 刘云朋 孔德治 王青华 曲良建

王少博, 谢丹洁, 张泽辉, 刘云朋, 孔德治, 王青华, 曲良建. 落叶松尺蛾核型多角体病毒形态特征及分子检测技术建立[J]. 陆地生态系统与保护学报, 2024, 4(1): 59-65. doi: 10.12356/j.2096-8884.2024-0008
引用本文: 王少博, 谢丹洁, 张泽辉, 刘云朋, 孔德治, 王青华, 曲良建. 落叶松尺蛾核型多角体病毒形态特征及分子检测技术建立[J]. 陆地生态系统与保护学报, 2024, 4(1): 59-65. doi: 10.12356/j.2096-8884.2024-0008
Shaobo Wang, Danjie Xie, Zehui Zhang, Yunpeng Liu, Dezhi Kong, qinghua Wang, Liangjian Qu. Morphological Characteristics of Erannis ankeraria Nucleopolyhedrovirus and Establishment of Molecular Detection Technique[J]. Terrestrial Ecosystem and Conservation, 2024, 4(1): 59-65. doi: 10.12356/j.2096-8884.2024-0008
Citation: Shaobo Wang, Danjie Xie, Zehui Zhang, Yunpeng Liu, Dezhi Kong, qinghua Wang, Liangjian Qu. Morphological Characteristics of Erannis ankeraria Nucleopolyhedrovirus and Establishment of Molecular Detection Technique[J]. Terrestrial Ecosystem and Conservation, 2024, 4(1): 59-65. doi: 10.12356/j.2096-8884.2024-0008

落叶松尺蛾核型多角体病毒形态特征及分子检测技术建立

doi: 10.12356/j.2096-8884.2024-0008
基金项目: 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目(CAFYBB2022ZB001,CAFYBB2020SY022)
详细信息
    作者简介:

    王少博:E-mail:18848966357@163.com

    通讯作者:

    E-mail:qulj2001@caf.ac.cn

  • 中图分类号: S763.42

Morphological Characteristics of Erannis ankeraria Nucleopolyhedrovirus and Establishment of Molecular Detection Technique

  • 摘要:   目的  落叶松尺蛾核型多角体病毒(Erannis ankeraria nucleopolyhedrovirus,EranNPV)是有效调控落叶松尺蛾种群数量和质量的重要生物因子,明确EranNPV超微形态学结构,研究并建立其精准灵敏的分子(PCR)快速检测技术,有助于深入探究该病毒的传播机制和林间流行规律,从而为利用该病毒持续控制落叶松尺蛾提供技术支撑。  方法  利用扫描电镜和透射电镜对EranNPV多角体的外部形态和内部结构特征进行观察;根据EranNPV的ac54基因设计用于PCR检测的特异性引物EaV,通过多种昆虫病毒的PCR扩增结果验证引物特异性,测试该PCR检测技术体系对EranNPV基因组DNA和病毒悬浮液的灵敏性。  结果  电镜观察结果表明,该病毒多角体多为表面光滑的不规则多面体,少数多角体表面散布孔洞凹陷,平均直径为1.43 ± 0.20 μm,多角体内的病毒粒子呈单束分布,平均长度为219.14 ±17.50 nm;以EaV为引物,只有EranNPV能够扩增到目的条带,利用EaV为引物建立的PCR检测技术对EranNPV基因组DNA的检测灵敏度可达10 fg/mL,对EranNPV悬浮液的检测灵敏度可达1×102 OBs/mL。  结论  EranNPV为典型的单粒包埋型核型多角体病毒,利用EaV引物建立的PCR检测技术具有高度的特异性和灵敏度,有望进一步应用于EranNPV的林间传播和流行病学研究当中。
  • 图  1  落叶松尺蛾核型多角体病毒超微结构

    Figure  1.  Ultrastructure of Erannis ankeraria nucleopolyhedrovirus

    图  2  利用EaV引物检测不同核型多角体病毒基因组的扩增结果

    M:DL2000 Marker,1~8:EranNPV、HycuNPV、EcobNPV、ApciNPV、LydiNPV、SpliNPV、NezhNPV、阴性对照Negative control (ddH2O) 。

    Figure  2.  Detection of different nucleopolyhedrovirus genomes using primer pair EaV

    图  3  不同浓度EranNPV基因组ac54基因扩增结果

    M:DL2000 Marker,1:阴性对照Negative control (ddH2O) ,2~7:1 μg/mL、1 ng/mL、1 pg/mL、100 fg/mL、10 fg/mL、1 fg/mL。

    Figure  3.  Amplifications of ac54 in different concentrations of EranNPV genomic DNA using primer pair EaV

    图  4  不同浓度EranNPV悬浮液ac54基因扩增结果

    M:DL2000 Marker,1:阳性对照Positive control (1 ng/mLEranNPV DNA) ,2:阴性对照Negative control (ddH2O) ,3~11:1×109、1×108、1×107、1×106、1×105、1×104、1×103、1×102、1×101 OBs/mL。

    Figure  4.  Amplifications of ac54 in different concentrations of EranNPV using primer pair EaV

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出版历程
  • 收稿日期:  2024-01-30
  • 网络出版日期:  2024-04-18
  • 刊出日期:  2024-02-01

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